HG_T 3616-1999
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ID： |
425A13C072434F068913E287514B24E9 |
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文件大小(MB)： |
0.33 |
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页数： |
10 |
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文件格式： |
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日期： |
2005-8-25 |
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He 3616-1999,前言,本 标 准 是根据我国以往制定的苏云金杆菌企业标准等有关材料，结合我国实际情况而制定的,本 标 准 对苏云金杆菌原粉的要求、试验方法、抽样以及包装、运输等作了具体要求和规定，从而为苏,云金杆菌生产提供了统一的技术依据,本 标 准 的附录A是提示的附录，附录B是标准的附录,本 标 准 由中华人民共和国原化学工业部技术监督司提出,本 标 准 由化学工业部沈阳化工研究院归口,本 标 准 主要起草单位:中国农业大学应用化学系,本标 准 参 加起草单位:湖北省生物农药工程研究开发中心、济南科贝尔生物工程有限公司,本 标准 主要起草人:刘丰茂、王开梅、钱传范、钟连胜、赵欣听、王绮文,1156,中华人民共和国化工行业标准,HG 3616-1999,苏云金杆菌原粉,Bacillus thuringiensis technical,苏 云金 杆 菌(Bacillust huringiensis,B.t)是目前应用最广泛的一种微生物杀虫剂，它的主要杀虫,成分是伴抱晶体中的毒素蛋白，其中，对鳞翅目有毒力的蛋白相对分子质量为130 000,范围,本标准规定了苏云金杆菌原粉的要求、试验方法以及标志、标签、包装、贮运,本标准适用于防治鳞翅目害虫的苏云金杆菌原粉,2 引用标准,下 列 标 准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均,为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性,GB /T 1 250-1989 极限数值的表示方法和判定方法,GB /T 1 600-19790989) 农药水分测定方法,GB /T 1 601-1993 农药pH值的测定方法,GB /T 1 604-1995 商品农药验收规则,GB /T 1 605-19790989) 商品农药采样方法,GB 3 79 6-1983 农药包装通则,GB /T 1 6150-1995 农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法,3 要求,3.1 外观:灰白色至棕褐色粉末,3.2 苏云金杆茵原粉应符合表1要求,表 1 苏 云 金 杆 菌 原 粉 控 制 项 目 指 标,项目,指标,一等品合格品,毒素蛋白，% ) 7.0 6.0,毒力效价([Px IU/mg口[Ha IU/mg]) ) 50 000 40 000,pH值5.5^ 7.0,水分，0/a 《6.0,细度，45ja m,0, ) 98,注:Px和Ha分别为小菜蛾(Plutella xylostella)和棉铃虫(Heliothis armigera)缩写.,国家石油和化学工业局1999-06-16批准2000一06一01实施,1 57,HG 3616一1999,4 试验方法,除 另有 说 明，本方法所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水溶液,4.1 抽样,按 照 Gs /T 1605-19790989)中“原粉采样”进行，用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量,应不少于100 go,4.2 鉴别试验,当 用 生 物测定法评价产品质量产生疑问时，可用以下方法进行鉴定,用 十 二 烷基硫酸钠一聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法测定有效毒素蛋白的相对分子质量是,否为130 000，同时测定其含量是否符合3. 2指标的规定,4.3 毒素蛋白含量测定方法,毒素 蛋 白含量可以用SDS-PAGE一扫描法和SDS-PAGE一洗脱比色法两种方法进行测定，二者精密,度、准确度接近，前者由于自动化程度更高，而定为仲裁法,4. 3门SDS-PAGE一扫描法(仲裁法),4.3.1门方法提要,用 碱 性 溶液处理苏云金杆菌原粉伴抱晶体，使其降解为毒素蛋白，然后通过SDS-PAGE，依蛋白质,相对分子质量的差异，使毒素蛋白与其他杂蛋白分离，之后用薄层扫描仪或电泳图像扫描仪扫描蛋白区,带面积，进行定量,4.3.1.2 仪器、设备,电 泳 仪 ,夹芯 式 垂 直电泳槽(1.5m m凹形带槽橡胶模框)、凝胶板面积145m mX100m m(1.5 m m,12 孔样,品槽模具),高 速 薄 层层析扫描仪或电泳图像扫描仪,离心 机 : 100 00r /min,分析 天 平 :精确至0.00 01 g ,4.3.1.3 试剂和溶液,过硫 酸 按 (AP),十 二 烷 基硫酸钠(SDS),四 甲基 乙 二胺(TEMED),氢 氧 化 钠,30 %丙 烯 酸胺:称取丙烯酸胺30g ，亚甲基双丙烯酞胺(原称:甲叉双丙烯酞胺)0.8g，溶于100m L,蒸馏水中，过滤，于4'C暗处贮存备用,1m ol /L ,pH8.8三9基甲基氨基甲烷-HCI缓冲液:称取三9基甲基氨基甲烷30.25 g 溶于蒸馏水,中，用浓盐酸调至pH8. 8，用蒸馏水定容至250 mL.,1m ol /L ,pH6.8三经基甲基氨基甲烷-HCI缓冲液:称取三经基甲基氨基甲烷12.10 g 溶于蒸馏水,中，用浓盐酸调至pH6. 8，用蒸馏水定容至100 mL,电极 缓 冲 液:称取三经基甲基氨基甲烷3.03 g ，甘氨酸14.42 g ，十二烷基硫酸钠1g，用水溶解并定,容至1 000 ML,3X 样 品 稀释液:1m ol/L,PH6.8= g基甲基氨基甲烷-HCI1 8.75m L，十二烷基硫酸钠6g，甘油,30 mL,琉基乙醇15 mL，少许澳酚蓝，用燕馏水定容至100 mL,染色 液 称取考马斯亮蓝(CBB)R-2501 g ，加人甲醇450m L，冰乙酸100m L,蒸馏水450m L,溶解,过滤后使用,脱 色 液 量取甲醇100m L，冰乙酸35m……
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